茚三酮笔名“茚满三酮”、“水合茚三酮”、“宁海群”。白色柱晶,在125℃或舍弃过久变红,239~240℃瓦解,微溶于水,易溶于丙酮、丁醇等有机溶剂。在溶液中遇α-氨基酸,或任何含α-氨基物资能形成深蓝色乃至粉红或红色物资,故常用作朊类降解物和α-氨基化合物试剂。此项反映又叫“茚三酮反映”。
茚三酮被看成氨基酸的薄层分析的显色剂,其旨趣是氨基酸与茚三酮水合物在弱酸条款下共加热时,氨基酸被氧化脱氨、脱羧,而茚三酮水合物被规复,其规复物可与氨基酸加热瓦解产生的氨连合,再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化合物,称为罗曼紫。旧例的氨基酸薄层分析口头是将茚三酮溶液平直喷洒在层析好的往时薄层板名义,不仅不成竣事显色直读,更因为喷洒的量难以限度,而且易将薄层层析板名义松弛,形因素析的困难。
连年,显色直读式检测技艺在食物加工、药物分析、农居品安全、环境监测、临床医学等鸿沟有较大的阛阓需求。与仪器分析技艺比拟,显色直读式检测省俭时候、镌汰了分析资本,有助于分娩与商榷东谈主员快速对特定的化合物定性与定量。
应用[1-4]茚三酮是用来检测α-氨基酸与多肽常用的显色剂。其应用例如如下:
1. 茚三酮显色法测定壳聚糖含量。壳聚糖是甲壳素的脱乙酰基繁衍物,是一种分子量较大的碱性多糖。由于分子间和分子内浓烈的氢键作用,壳聚糖在水及大多数溶剂中的融解性较差,可溶于醋酸等无机酸的稀溶液中。壳聚糖过甚繁衍物具有较强的生物活性,具有抗肿瘤、抗凝血、抗血栓、降血脂和增强免疫力等功能。壳聚糖还具有精好意思的生物降解性和生物相容性,被泛泛应用于生物医学、环境科学、食物等鸿沟。跟着壳聚糖居品的大皆拓荒及上市,对其进行含量测定也逐步受到了怜爱。
有商榷左证壳聚糖与茚三酮作用形成的复合物在570nm 处有特征招揽的特点,建筑了欺诈分光光度法测定壳聚糖含量的口头。该测定口头的允洽条款为:在pH5. 5 的HAc-NaAc 缓冲体系中,当缓冲溶液用量为2. 00mL、茚三酮( 浓度为10. 00g/L ) 用量为1. 00mL、加热煮沸20min 时,显色斥逐最好。
在0. 004~0. 04 g/L 浓度范围内,壳聚糖浓度与其吸光度值线性关系精好意思,所得要领弧线方程为:y = 23. 942x + 0. 1423,相关扫数r2 =0. 9981。厚实性、重现性和回收率践诺斥逐标明,该显色口头在2h 内厚实性精好意思,精密度可靠。
践诺中发现,壳聚糖与茚三酮作用显色后,除了在570nm 处有显耀的紫外招揽外,在408nm 处也有一明显招揽,况且与壳聚糖的浓度具有较好的线性联系性。测度是由于显色流程中编削了壳聚糖结构所致,在今后的商榷中可赐与关注。践诺斥逐标明,欺诈茚三酮显色法测定壳聚糖含量的践诺口头操作约略,反映条款也比较容易限度,且重现性好,适用于样品中微量壳聚糖的检测。
2. 茚三酮法定性定量检测丝氨酸。跟着东谈主们对丝氨酸生理作用的深刻缔结和医药保健作事的持续发展,医药、食物、饲料等行业对丝氨酸的需求量正飞速扩大。固然L-丝氨酸属于非必需氨基酸,但它却具有好多清苦的生理功能及用途,在医药、食物、化妆品中均有较为泛泛的应用。因此,测定夹杂氨基酸中丝氨酸的含量对丝氨酸的拓荒利器具有清苦赞佩。α-氨基酸与茚三酮在弱酸性溶液中共热,反映后经失水脱羧生成氨基茚三酮,再与水合茚三酮反映生成紫红色或蓝色物资
脯氨酸等仲胺氨基酸与茚三酮反映生成黄色物资。丝氨酸和茚三酮在弱酸性条款下共热不错生成紫红色的缩合物资,且其情愫跟着丝氨酸的含量变化而有所不同为了快速约略地检测氨基酸水解液中丝氨酸的含量,有商榷建议了一种基于氨基酸纸表层析的纠正茚三酮显色法,并将其应用于难以分手的氨基酸的检测。最初,将茚三酮加入到展层剂中,再对氨基酸夹杂液进行层析。
在一定条款下将层析后的茚三酮与氨基酸进行显色反映,左证不同情愫即可辨认丝氨酸。然后,对不同剂量的丝氨酸要领液使用上述口头绘图丝氨酸要领液的吸光度-含量的要领弧线,用以筹划氨基酸水解液丝氨酸的含量。斥逐标明:茚三酮法定性定量检测丝氨酸的最好践诺条款为溶液pH在4.5傍边,显色剂用量为每10mL展层剂中加入2.5mL0.1%茚三酮,并在105℃下加热5min。
3. 茚三酮真空熏显指摹。1910 年,英国科学家鲁赫曼在践诺时,意外中合成一种新的化合物-水合茚三酮。随后,鲁赫曼发现水合茚三酮能与氨基酸反映生成一种紫色产物,这种紫色后被称为鲁赫曼紫。1954 年,两位瑞典科学家奥登和霍夫施坦最初建议用茚三酮清晰潜在指摹。于今,茚三酮一直是清晰渗入客体检材上潜在指印的最常用、最有用的清晰口头。
茚三酮主若是通过与指摹留传物中的氨基酸发生反映,产生紫色的夹杂物达到清晰潜在指摹的指标。茚三酮在真空加关注况下不错升华,成茚三酮蒸汽。当茚三酮蒸汽际遇指摹留传物中的氨基酸时,茚三酮与氨基酸发生反映,变成紫色的夹杂物,从而清晰潜指摹。操作时,不错欺诈真空熏显柜,如莫得真空熏显柜,也不错平直用乙醇灯加热口头。
操作口头如下:把样品固定在真空加热加湿熏显柜内,把锡箔碗放在加热器上,碗中均匀撒放0.1 ~ 0.5g 茚三酮晶体。先把柜子抽到真空,再接通加热电源,当到达一定温度时,茚三酮晶体升华变成气体,与样品上指摹留传物中的氨基酸发生反映,显出指纹。
由于真空加热加湿熏显仪能加热,使茚三酮晶体平直升华成气体,与指摹中的氨基酸发生反映;真空条款则保证茚三酮晶体快速升华,变成气体,并能在柜内均匀扩散,有用与指摹中的氨基酸发生反映,保证清晰质料;加湿省略有用改善熏显斥逐,明显提妙指摹清晰率。
4. 制备茚三酮/纳米二氧化钛复合物。制备口头包括:技艺1,配制先行者体溶液;技艺2,欺诈抽滤将先行者体溶液通过经脱水束缚的滤膜,使滤膜弥散吸附先行者体溶液;技艺3,雷同欺诈抽滤将茚三酮溶液通过滤膜,反映生成茚三酮/纳米二氧化钛复合物。所述复合物对氨基酸具有较好的显色聪慧度,可看成薄层层析板检测氨基酸的显色剂。将上述复合物掺入到薄层层析板的固定相中制得新式薄层层析板,欺诈该薄层层析板可竣事层析分手与显色流程一步完成,使用方便。
主要参考尊府[1] 茚三酮显色法测定壳聚糖含量
[2] 关洪亮, 熊倩, 余训民, 等. 茚三酮法定性定量检测丝氨酸[J]. 武汉工程大学学报, 2012, 34(11): 40-43.
[3] 罗亚平, 王跃. 茚三酮真空熏显指摹口头商榷[J]. 中国东谈主民公安大学学报: 当然科学版, 2004, 10(3): 25-26.
[4] CN201510817477.3 茚三酮/纳米二氧化钛复合物过甚制备口头和用途